La PCR asimétrica es una variación de la PCR que se utiliza para amplificar preferentemente una cadena del ADN original más que la otra. [1] La técnica tiene aplicaciones en algunos tipos de secuenciación y sondeo de hibridación donde se requiere tener solo una de las dos cadenas complementarias . [2]
Metodología
La PCR asimétrica se diferencia de la PCR normal por la cantidad excesiva de iniciadores para una cadena elegida. Debido a la amplificación lenta (aritmética) más adelante en la reacción (una vez que se ha agotado el iniciador limitante), se requieren ciclos adicionales de PCR. [3]
Una modificación de este proceso, conocida como PCR lineal después de la exponencial (LATE-PCR) , utiliza un cebador limitante con una temperatura de fusión más alta que el cebador en exceso para mantener la eficiencia de la reacción a medida que la concentración del cebador limitante disminuye a mitad de la reacción. [4]
Aplicaciones
La PCR asimétrica se puede utilizar para formar ADN monocatenario a partir de ADN bicatenario, que luego se utiliza para la secuenciación de ADN en el método de mutagénesis . [ cita requerida ] El ADN monocatenario también es importante para la generación de aptámeros . [1]
Referencias
- ^ ab Citartan, Marimuthu; et al. (diciembre de 2011). "PCR asimétrica para la generación de ssDNA de buena calidad con vistas a la producción de aptámeros de ADN" (PDF) . Songklanakarin J. Sci. Technol . 34 (2): 125–131. Archivado desde el original (PDF) el 2020-01-11 . Consultado el 2017-11-18 .
- ^ Wooddell, CI; Burgess, RR (1996). "Uso de PCR asimétrica para generar iniciadores largos y ADN monocatenario para incorporar análogos de entrecruzamiento en sitios específicos en una sonda de ADN". Genome Res . 6 (9): 886–892. doi : 10.1101/gr.6.9.886 . PMID 8889557.
- ^ Heiat, Mohammad; et al. (14 de enero de 2017). "Estrategias esenciales para optimizar las condiciones de PCR asimétrica como un método confiable para generar una gran cantidad de aptámeros de ssDNA". Biotecnología y bioquímica aplicada . 64 (4): 541–548. doi :10.1002/bab.1507. PMID 27222205. S2CID 21792777.
- ^ Sanchez, J. Aquiles; et al. (4 de diciembre de 2003). "PCR lineal después de la exponencial (LATE): un método avanzado de PCR asimétrica y sus usos en el análisis cuantitativo en tiempo real". Actas de la Academia Nacional de Ciencias . 101 (7): 1933–1938. doi : 10.1073/pnas.0305476101 . PMC 357030 . PMID 14769930.
