Testin (también conocida como TESS ) es una proteína que en los humanos está codificada por el gen TES ubicado en el cromosoma 7. [ 5] TES es una proteína de 47 kDa compuesta por 421 aminoácidos que se encuentran en las adherencias focales y se cree que tiene un papel en la regulación de la motilidad celular . [6] Además de esto, TES funciona como un supresor de tumores . [7] El gen TES está ubicado dentro de una región frágil del cromosoma 7 , y se ha demostrado que los elementos promotores del gen TES son susceptibles a la metilación , lo que evita la expresión de la proteína TES. TES adquirió mayor importancia hacia fines de 2007 cuando se publicó un mecanismo potencial para su función supresora de tumores .
Tes se compone de los siguientes dominios:
No se conocen las estructuras del dominio rico en cisteína ni del dominio PET. Sin embargo, se sabe que los dominios LIM son moduladores de las interacciones proteicas. [8] El dominio LIM consta de 2 dedos de zinc separados por 2 aminoácidos hidrofóbicos (generalmente una fenilalanina y luego una leucina ).
El TES no parece ser una enzima , sino una proteína que media/regula las funciones celulares a través de interacciones proteína-proteína . Los experimentos de pull-down [9] revelan que el TES tiene interacciones putativas mediadas por el dominio indicado:
Garvalov et al. demostraron que la interacción entre TES y zyxina era directa, utilizando proteínas recombinantes expresadas en E. coli . [9]
Algunos de los posibles socios de unión (Zyxin, mENA) se pueden encontrar en complejos de adhesión focal ; la variedad de socios de unión indica un papel potencial para TES entre la polimerización de actina "privilegiada" y los contactos de adhesión focal a la matriz extracelular . Esto coincide con la observación de que TES marcado con GFP se puede ver en adherencias focales.
En diciembre de 2007, Boeda, Briggs et al. [10] demostraron que el tercer dominio LIM de TES desplaza a Mena de sus posiciones subcelulares habituales ( adherencias focales o borde delantero de la célula). La familia de proteínas ENA/VASP (de la que Mena es miembro) está anclada a proteínas específicas dentro de la célula por un motivo peptídico que consiste en un residuo de fenilalanina , seguido de cuatro residuos de prolina , conocido como motivo FPPPP. Son los dominios EVH1 de las proteínas VASP/EVL los que contactan directamente con el motivo FPPPP. La arquitectura precisa de la unión TES:MENA se reveló por cristalografía de rayos X y mostró que el tercer dominio LIM de TES cubría el sitio de unión FPPPP dentro del dominio EVH1 de Mena. La calorimetría de titulación isotérmica mostró que TES tiene una mayor afinidad por Mena que su ligando FPPPP canónico, como se presenta en la proteína de adhesión focal zyxin. Mediante microscopía se demostró que la sobreexpresión de TES marcado con GFP o solo el tercer dominio LIM marcado desplazaron a Mena de las adherencias focales y redujeron la velocidad celular media.
Estos hallazgos fueron significativos dado que Mena a menudo se sobreexpresa en las células cancerosas y se cree que es parcialmente responsable de la motilidad de las células cancerosas y, por lo tanto, un factor en la metástasis del cáncer . Por el contrario, el TES a menudo no se produce en las células cancerosas. Es posible que un fármaco diseñado para imitar la interacción del TES con Mena pueda usarse para prevenir la metástasis y, por lo tanto, el desarrollo de tumores secundarios en pacientes con cáncer. El trabajo fue ampliamente difundido en la prensa británica (el trabajo fue realizado por Cancer Research UK ), [11] [12] [13] y también en la prensa internacional. [14] [15]
Basado en las observaciones de que: [ cita requerida ]
Garvalov et al. proponen que el TES existe en dos estados conformacionales: un estado "cerrado" en el que las mitades N y C del TES interactúan, ocultando el sitio de unión de la zixina en LIM1, y un estado "abierto" en el que el sitio de unión de la zixina es accesible y las dos mitades ya no interactúan de la misma manera, si es que lo hacen. El mecanismo regulador que cambia entre los dos estados no se comprende por completo en la actualidad.
En experimentos de ARNi , las células que tenían una expresión de TES deteriorada mostraron una incapacidad para organizar correctamente sus adherencias focales y sus fibras de estrés de actina .
En experimentos de eliminación de genes, los ratones transgénicos que carecían de ambas copias del gen TES mostraron una mayor susceptibilidad a la formación de tumores cuando se los expuso a un carcinógeno. Los ratones que conservaban el gen TES eran menos susceptibles: por lo tanto, el TES es un gen supresor de tumores.