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Fluorómetro de cúbits

El fluorómetro Qubit es un instrumento de laboratorio desarrollado y distribuido por Invitrogen , que ahora forma parte de Thermo Fisher . Se utiliza para la cuantificación de ADN , ARN y proteínas . [1] [2] [3] [4]

Método

El método del fluorómetro Qubit consiste en utilizar colorantes fluorescentes para determinar la concentración de ácidos nucleicos o proteínas en una muestra. Los colorantes fluorescentes especializados se unen específicamente a las sustancias de interés. En este método se utiliza un espectrofotómetro para medir la absorbancia natural de la luz a 260 nm (para ADN y ARN) o 280 nm (para proteínas). [5] [6] [7] [8]

Tintes fluorescentes

Los ensayos Qubit (antes conocidos como Quant-iT) fueron desarrollados y fabricados previamente por Molecular Probes (ahora parte de Life Technologies ). Cada colorante está especializado para un tipo de molécula (ADN, ARN o proteína). Estos colorantes exhiben una fluorescencia extremadamente baja hasta que se unen a su molécula objetivo. Al unirse al ADN, las moléculas de colorante asumen una forma más rígida y aumentan la fluorescencia en varios órdenes de magnitud, muy probablemente debido a la intercalación entre las bases. [9] [10]

El fluorómetro Qubit, un dispositivo diseñado para medir las señales de fluorescencia de las muestras, funciona correlacionando estas señales con concentraciones conocidas de sondas. Este proceso le permite transformar los datos de fluorescencia en una medición de concentración cuantificada. El dispositivo utiliza esta relación establecida para determinar con precisión la concentración de una muestra.

Un ejemplo específico de esta tecnología es el fluorómetro Qubit 2.0, que se utiliza a menudo junto con el "kit de ensayo dsDNA BR". Este kit, junto con otros del sistema de cuantificación Qubit, incorpora colorantes. Estos colorantes son sensibles a diferentes biomoléculas y sus concentraciones. En este contexto, "ds" denota ADN de doble cadena y "ss" significa ADN de cadena sencilla, lo que indica los tipos específicos de ADN que los colorantes pueden detectar.

Versiones

La segunda generación, el fluorómetro Qubit 2.0, se lanzó en 2010, y la tercera generación, como Qubit 3.0, en 2014. La versión más reciente es la cuarta generación Qubit 4, presentada en 2017.

Referencias

  1. ^ Acar E, et al. (2009). "Estudios de optimización y validación del kit MentypeR Argus X-8 para casos de paternidad". Forensic Sci Int Genet Suppl . 2 : 47–48. doi :10.1016/j.fsigss.2009.08.189.
  2. ^ Bakos J, et al. (2009). "Un entorno enriquecido influye en el estado hormonal y el factor neurotrófico derivado del hipocampo cerebral de una manera dependiente del sexo". Neurociencia . 164 (2): 788–797. doi :10.1016/j.neuroscience.2009.08.054. PMID  19723563. S2CID  23809910.
  3. ^ Halaihel N, et al. (2009). "Un nuevo ensayo basado en PCR en tiempo real para diagnosticar Renibacterium salmoninarum en trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss) y comparación con otras técnicas". J Microbiol Methods . 76 (1): 75–80. doi :10.1016/j.mimet.2008.09.014. PMID  18938198.
  4. ^ Hamza IA, et al. (2009). "Detección y cuantificación del bocavirus humano en agua de río". J Gen Virol . 90 (Pt 11): 2634–2637. doi : 10.1099/vir.0.013557-0 . PMID  19656966.
  5. ^ Manchester, KL (1996). "Uso de métodos UV para la medición de concentraciones de proteínas y ácidos nucleicos". BioTechniques . 20 (6): 968–970. doi : 10.2144/96206bm05 . PMID  8780864.
  6. ^ Glasel, JA (1995). "Validez de las purezas de los ácidos nucleicos controladas por relaciones de absorbancia de 260 nm/280 nm". BioTechniques . 18 (1): 62–63. PMID  7702855.
  7. ^ Huberman, JA (1995). "Importancia de medir la absorbancia de los ácidos nucleicos a 240 nm, así como a 260 y 280 nm". BioTechniques . 18 (4): 636. PMID  7598897.
  8. ^ Manchester, KL (1995). "Valor de las proporciones A260/A280 para la medición de la pureza de los ácidos nucleicos". BioTechniques . 19 (2): 208–210. PMID  8527139.
  9. ^ McKnight, RE, Gleason, AB, Keyes, JA, Sahabi, S. (2006). "Estudios de afinidad y modo de unión de agentes de unión al ADN utilizando el ensayo de desenrollado del ADN de la topoisomerasa I". Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters . 17 (4): 1013–1017. doi :10.1016/j.bmcl.2006.11.038. PMID  17157016.{{cite journal}}: CS1 maint: multiple names: authors list (link)
  10. ^ Schweitzer, C.; Scaiano, JC (2003). "Unión selectiva y fotofísica local del colorante fluorescente de cianina PicoGreen en ADN monocatenario y bicatenario". Química física Química Física . 5 (21): 4911–4917. Bibcode :2003PCCP....5.4911S. doi :10.1039/b305921a.

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