La prueba de neutralización por reducción de placa se utiliza para cuantificar el título de anticuerpos neutralizantes para un virus. [1] [2]
La muestra de suero o la solución de anticuerpos que se va a analizar se diluye y se mezcla con una suspensión viral. Esta se incuba para permitir que el anticuerpo reaccione con el virus. Esta se vierte sobre una monocapa confluente de células huésped. La superficie de la capa celular se cubre con una capa de agar o carboximetilcelulosa para evitar que el virus se propague indiscriminadamente. La concentración de unidades formadoras de placa se puede estimar por el número de placas (regiones de células infectadas) formadas después de unos días. Dependiendo del virus, las unidades formadoras de placa se miden mediante observación microscópica, anticuerpos fluorescentes o colorantes específicos que reaccionan con las células infectadas. [3]
La concentración de suero necesaria para reducir el número de placas en un 50% en comparación con el virus libre en suero proporciona la medida de la cantidad de anticuerpos presentes o de su eficacia. Esta medida se denomina valor PRNT 50 .
Actualmente se considera el “patrón oro” para detectar y medir anticuerpos que pueden neutralizar los virus que causan muchas enfermedades. [4] [5] Tiene una mayor sensibilidad que otras pruebas como la hemaglutinación y muchos inmunoensayos enzimáticos comerciales sin comprometer la especificidad . Además, es más específico que otros métodos serológicos para el diagnóstico de algunos arbovirus.
Sin embargo, la prueba es relativamente complicada y requiere mucho tiempo (unos pocos días) en comparación con los kits EIA que dan resultados rápidos (generalmente varios minutos a unas pocas horas). [ cita requerida ]
Un problema con este ensayo que se ha identificado recientemente es que la capacidad de neutralización de los anticuerpos depende del estado de maduración del virión y del tipo de célula utilizado en el ensayo. [6] Por lo tanto, si se utiliza la línea celular incorrecta para el ensayo, puede parecer que los anticuerpos tienen capacidad de neutralización cuando en realidad no la tienen, o viceversa, pueden parecer ineficaces cuando en realidad poseen capacidad de neutralización. [ cita requerida ]