La prueba de extensión Poly(A) (ePAT) describe un método para determinar la longitud de la cola de poli(A) de las moléculas de ARNm . Fue desarrollada y descrita por A. Jänicke et al. en 2012.
El método consta de tres pasos separados: en el primer paso, el ARN poliadenilado se hibrida con un oligonucleótido de ADN que presenta una secuencia de polidesoxitimidina en su extremo 5'. A continuación, la polimerasa Klenow cataliza la elongación del extremo 3' del ARNm, utilizando el oligonucleótido de ADN como plantilla. Esta reacción tiene lugar a 25 °C. En el segundo paso, la síntesis de la transcriptasa inversa extiende los oligonucleótidos de ADN que se han hibridado con el extremo 3' extendido del ARNm. Para garantizar que los oligómeros de ADN hibridados con secuencias poli(A) internas no sirvan como cebadores para la transcripción inversa, el segundo paso se lleva a cabo a 55 °C. Un tercer y último paso implica la amplificación del ADNc recién sintetizado mediante PCR . Esta PCR requiere un cebador específico del gen y uno universal. El análisis de las longitudes de los amplicones permite estimar la secuencia flanqueada por los dos cebadores, es decir, la longitud de la cola poli(A) del ARNm de muestra.
Según los autores, la medición de las longitudes de las colas de poli(A) y su distribución entre diferentes transcripciones permite utilizar este método para determinar el estado de traducción de la célula en lugar del análisis más tedioso de los estados de traducción de las proteínas. [1]