La visualización diferencial (también conocida como DDRT-PCR o DD-PCR ) es una técnica de laboratorio que permite a un investigador comparar e identificar cambios en la expresión genética a nivel de ARNm entre dos o más muestras de células eucariotas. [1] Fue el método más utilizado para comparar perfiles de expresión de dos muestras de células eucariotas en la década de 1990. [1] En el año 2000, la visualización diferencial fue reemplazada por enfoques de microarrays de ADN . [2]
En la visualización diferencial, primero se transcribe de forma inversa todo el ARN de cada muestra utilizando un conjunto de " cebadores anclados" 3 ' (que tienen una secuencia corta de nucleótidos de desoxitimidina al final) para crear una biblioteca de ADNc para cada muestra, seguido de la PCR. amplificación utilizando cebadores 3 ' arbitrarios para la amplificación de la cadena de ADNc junto con cebadores 3 ' anclados para la amplificación de la cadena de ARN, idénticos a los utilizados para crear la biblioteca; unos cuarenta cebadores arbitrarios es el número óptimo para transcribir casi todo el ARNm. Las transcripciones resultantes se separan mediante electroforesis y se visualizan para poder compararlas. [1] El método era propenso a errores debido a que diferentes ARNm migraban a bandas individuales, las diferencias en los ARNm menos abundantes quedaban ahogadas por los ARNm más abundantes, [1] sensibilidad a pequeños cambios en las condiciones del cultivo celular y una tendencia a amplificar fragmentos 3 ′ . en lugar de ARNm completos, y la necesidad de utilizar unos 300 cebadores para capturar todo el ARNm. [3] : 316–317 El método se publicó por primera vez en Science en 1992. [1] [4]