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Agar de recuento en placa

El agar de recuento en placa ( PCA ), también llamado agar de métodos estándar ( SMA ), es un medio de crecimiento microbiológico que se utiliza comúnmente para evaluar o monitorear el crecimiento bacteriano "total" o viable de una muestra. El PCA no es un medio selectivo.

El número total de bacterias aerobias vivas se puede determinar utilizando un agar de recuento en placa, que es un sustrato sobre el que las bacterias crecen. El medio contiene caseína , que aporta nitrógeno , carbono , aminoácidos , vitaminas y minerales para ayudar al crecimiento del organismo. El extracto de levadura es la fuente de vitaminas, en particular del grupo B. La glucosa es el carbohidrato fermentable y el agar es el agente solidificante. Este es un medio no selectivo y las bacterias se cuentan como unidades formadoras de colonias por gramo (UFC/g) en muestras sólidas y (UFC/ml) en muestras líquidas.

Técnica de vertido en placa

La técnica de vertido en placa es la técnica típica que se utiliza para preparar agares de recuento en placa. En este caso, el inóculo se añade al agar fundido antes de verterlo en la placa. El agar fundido se enfría a unos 45 grados Celsius y se vierte mediante un método estéril en una placa de Petri que contiene una muestra diluida específica. A partir de aquí, las placas se giran para garantizar que las muestras se mezclen uniformemente con el agar. La incubación de las placas es el siguiente paso y se lleva a cabo durante unos 3 días a una temperatura de entre 20 y 30 grados Celsius.

Composición

Beneficios

Obtención de colonias aisladas a partir de agares de recuento en placa

Una vez que se ha preparado con éxito una placa, las células del agar de recuento en placa crecerán hasta convertirse en colonias que se pueden aislar lo suficiente para determinar el tipo de célula original. La unidad formadora de colonias (UFC) es una descripción adecuada del origen de la colonia. En los recuentos en placa, se cuentan las colonias, pero el recuento suele registrarse en UFC. Debido a que las colonias que crecen en placas pueden comenzar como una sola célula o como un grupo de células, las UFC permiten una descripción correcta de la densidad celular. El método de estrías en placa [2] ayuda a identificar el microbio desconocido al producir colonias individuales en una placa de agar, lo que permite utilizar el método de UFC:

  1. Comenzando con el patrón de rayas, etiquete la base de la placa. Luego, visualice la placa en cuatro cuadrantes:
    • arriba a la izquierda (yo),
    • arriba a la derecha (II),
    • abajo a la derecha (III),
    • abajo a la izquierda (IV).

Extiende el cultivo mixto de un lado a otro en el primer cuadrante (arriba a la izquierda) de la placa de agar. No cortes el agar, simplemente raspa la parte superior. Flamea el asa para eliminar los residuos del cultivo. Espera a que se enfríe para el siguiente cuadrante.

  1. Vuelva a realizar las rayas. Proceda al segundo cuadrante con las rayas. Las rayas en el medio se superpondrán. Flamee el asa para eliminar los residuos del cultivo. Espere a que se enfríe para el siguiente cuadrante.
  2. Nueva formación de vetas. Gire la placa 180 grados para obtener un ángulo de formación de vetas adecuado en el tercer cuadrante. Asegúrese de enfriar los bucles antes de formar vetas en el cuadrante cuatro.
  3. Hacer rayas en el centro. Hacer una última raya comenzando en el cuadrante cuatro y hacia el centro de la placa. Flamear las asas. Incubar la placa durante el tiempo asignado y a la temperatura adecuada.

Referencias

  1. ^ "Capítulo P2. Agar de recuento en placa (PCA)", Handbook of Culture Media for Food and Water Microbiology , Cambridge: Royal Society of Chemistry, págs. 870–872, 2011, doi :10.1039/9781847551450-00870 , consultado el 10 de diciembre de 2021
  2. ^ Aryal, Sagar (8 de julio de 2021). "Método de placa de rayas: principio, métodos, importancia, limitaciones". Notas sobre microbios . Consultado el 10 de diciembre de 2021 .

1. "Agar de recuento en placa (PCA): medio de cultivo". Notas sobre microbios . 13 de mayo de 2019. Consultado el 6 de diciembre de 2021.

2. Aryal, Sagar (8 de julio de 2021). "Método de placa de rayas: principio, métodos, importancia, limitaciones". Notas sobre microbios . Consultado el 7 de diciembre de 2021.