La traducción de Nick [1] (o traducción de cabeza ), desarrollada en 1977 por Peter Rigby y Paul Berg, es una técnica de etiquetado en biología molecular en la que la ADN polimerasa I se utiliza para reemplazar algunos de los nucleótidos de una secuencia de ADN con sus análogos marcados. creando una secuencia de ADN marcada que puede usarse como sonda en técnicas de hibridación fluorescente in situ (FISH) o de transferencia . También se puede utilizar para radiomarcaje . [2]
Este proceso se llama traducción de mellas porque el ADN que se va a procesar se trata con ADNasa para producir "mellas" monocatenarias. A esto le sigue el reemplazo en los sitios mellados por la ADN polimerasa I , que alarga el extremo 3' hidroxilo , eliminando los nucleótidos mediante la actividad exonucleasa 5'-3', reemplazándolos con dNTP . Para marcar radiactivamente un fragmento de ADN para su uso como sonda en procedimientos de transferencia, uno de los nucleótidos incorporados proporcionados en la reacción se marca radioactivamente en la posición alfa fosfato. De manera similar, se puede unir un fluoróforo para el marcado fluorescente o un antígeno para la inmunodetección. Cuando la ADN polimerasa I finalmente se desprende del ADN, deja otra muesca en la columna vertebral de fosfato. La mella se ha "traducido" cierta distancia dependiendo de la procesividad de la polimerasa. Esta muesca podría sellarse mediante ADN ligasa , o su grupo 3' hidroxilo podría servir como plantilla para una mayor actividad de la ADN polimerasa I. Se encuentran disponibles comercialmente mezclas de enzimas patentadas para realizar todos los pasos del procedimiento en una sola incubación.
La traducción de mella podría causar roturas en la doble cadena del ADN, si la ADN polimerasa I encuentra otra mella en la hebra opuesta, lo que resultaría en dos fragmentos más cortos. Esto no influye en el rendimiento de la sonda marcada en la hibridación in situ.