Pequeñas unidades circulares de replicación de ADN
Preparación de un minicírculo a partir de un plásmido parental. El plásmido parental contiene dos sitios diana de recombinasa (flechas negras). La recombinación entre estos sitios genera el minicírculo deseado (abajo a la derecha) junto con el miniplásmido (abajo a la izquierda). El gancho en el inserto rojo del minicírculo representa una región de unión a la matriz del andamio ( elemento S/MAR ), que permite la replicación autónoma en la célula receptora.
Los minicírculos son pequeños derivados de plásmidos circulares (~4 kb) que se han liberado de todas las partes del vector procariota . Se han aplicado como portadores de transgenes para la modificación genética de células de mamíferos, con la ventaja de que, dado que no contienen secuencias de ADN bacteriano , es menos probable que se los perciba como extraños y se los destruya. (Los métodos típicos de administración de transgenes implican plásmidos, que contienen ADN extraño). El tamaño más pequeño de los minicírculos también amplía su capacidad de clonación y facilita su administración a las células.
Su preparación suele seguir un procedimiento de dos pasos: [4] [5]
Producción de un 'plásmido parental' (plásmido bacteriano con insertos eucariotas ) en E. coli
inducción de una recombinasa específica de sitio al final de este proceso, pero todavía en bacterias. Estos pasos son seguidos por la
Escisión de partes del vector procariota a través de dos secuencias diana de la recombinasa en ambos extremos del inserto.
recuperación del minicírculo resultante (vehículo para la modificación altamente eficiente de la célula receptora) y del miniplásmido mediante electroforesis capilar en gel (CGE)
El minicírculo purificado se puede transferir a la célula receptora mediante transfección o lipofección y a un tejido diferenciado mediante, por ejemplo, inyección a chorro .
Los minicírculos convencionales carecen de un origen de replicación , por lo que no se replican dentro de las células objetivo y los genes codificados desaparecerán a medida que la célula se divida (lo que puede ser una ventaja o una desventaja dependiendo de si la aplicación exige una expresión persistente o transitoria). Una nueva incorporación al campo son los minicírculos autorreplicantes no virales , que deben esta propiedad a la presencia de un elemento S/MAR . Los minicírculos autorreplicantes son muy prometedores para la modificación sistemática de células madre y ampliarán significativamente el potencial de sus formas precursoras plasmídicas ("plásmidos parentales"), más aún porque la viabilidad principal de tal enfoque se ha demostrado ampliamente para sus formas precursoras plasmídicas. [6] [7] [8] [9]
Véase también
Episomas – Tipo de plásmidoPáginas que muestran descripciones breves de los objetivos de redireccionamiento
Referencias
^ "Kinetoplastids and Their Networks of Interlocked DNA" (Los cinetoplástidos y sus redes de ADN entrelazado) . Consultado el 2 de septiembre de 2019 .
^ Barbrook, Adrian C.; Voolstra, Christian R.; Howe, Christopher J. (2014). "El genoma del cloroplasto de un aislado del clado C3 de Symbiodinium sp." Protist . 165 (1): 1–13. doi : 10.1016/j.protis.2013.09.006 . hdl : 10754/563301 . PMID 24316380.
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^ Nehlsen, Kristina; Broll, Sandra; Kandimalla, Raju; Heinz, Niels; Heine, Markus; Binius, Stefanie; Schambach, Axel; Bode, Jürgen (5 de abril de 2013). "Replicación de minicírculos: superación de las limitaciones de los sistemas de expresión transitorios y estables". En Schleef, Martin (ed.). Vectores de ADN miniplásmidos y minicírculos: el futuro de la transferencia de genes no virales y virales . Wiley‐VCH Verlag GmbH & Co. KGaA. págs. 115–162. doi :10.1002/9783527670420.ch8. ISBN9783527670420.
