Vector de ADN utilizado en bioingeniería.
Un cromosoma artificial derivado de P1, o PAC, es una construcción de ADN derivada del ADN de los bacteriófagos P1 y del cromosoma artificial bacteriano . Puede transportar grandes cantidades (entre 100 y 300 kilobases ) de otras secuencias para diversos fines de bioingeniería en bacterias . Es un tipo de vector de clonación eficaz que se utiliza para clonar fragmentos de ADN (tamaño de inserto de 100 a 300 kb; promedio, 150 kb) en células de Escherichia coli . [1]
Historia de la PAC
El bacteriófago P1 fue aislado por primera vez por el Dr. Giuseppe Bertani . En su estudio, notó que el lisógeno producía fagos anormales no continuos, y luego descubrió que el fago P1 se producía a partir de la cepa lisógena de Lisbonne, además de los bacteriófagos P2 y P3. P1 tiene la capacidad de copiar el genoma del huésped de una bacteria e integrar esa información del ADN en otros huéspedes de la bacteria, también conocido como transducción generalizada . [2] Más tarde, Nat Sternberg y sus colegas desarrollaron P1 como vector de clonación en la década de 1990. Es capaz de recombinación Cre-Lox . [3] [4] El sistema de vector P1 se desarrolló por primera vez para transportar fragmentos de ADN relativamente grandes en plásmidos (95-100 kb). [4]
Construcción
PAC tiene 2 sitios loxP , que pueden ser utilizados por las recombinasas de fagos para formar el producto a partir de su reconocimiento de cregen durante la recombinación Cre-Lox . Este proceso circulariza la cadena de ADN, formando un plásmido , que luego puede insertarse en bacterias como Escherichia coli . [4] La transformación generalmente se realiza mediante electroporación , que utiliza electricidad para permitir que los plásmidos penetren en las células. Si se desean niveles de expresión elevados, se puede utilizar el replicón lítico P1 en construcciones. [5] La electroporación permite la lisogenia de las PAC para que puedan replicarse dentro de las células sin alterar otros cromosomas. [1]
Comparación con otros cromosomas artificiales
PAC es uno de los vectores cromosómicos artificiales. Algunos otros cromosomas artificiales incluyen: el cromosoma artificial bacteriano , el cromosoma artificial de levadura y el cromosoma artificial humano . En comparación con otros cromosomas artificiales, puede transportar fragmentos de ADN relativamente grandes, aunque en menor medida que el cromosoma artificial de levadura (YAC). Algunas ventajas de los PAC en comparación con los YAC incluyen una manipulación más fácil del sistema bacteriano, una separación más fácil de los huéspedes del ADN, una mayor tasa de transformación, inserciones más estables y no son quiméricos, lo que significa que no se reorganizan ni se ligan para formar una nueva cadena de ADN, lo que permite una elección vectorial fácil de usar. [1]
Aplicaciones
El PAC se utiliza comúnmente como vector de gran capacidad que permite la propagación de grandes insertos de ADN en Escherichia coli . [1] Esta característica se ha utilizado comúnmente para:
- La construcción de bibliotecas genómicas para humanos, ratones, etc., [6] [7] ayuda con proyectos como el Proyecto Genoma Humano.
- las bibliotecas sirvieron como plantilla para la secuenciación de genes (ejemplo: utilizadas como plantilla de genes en el análisis de la función genética del ratón)
- análisis del genoma sobre funciones específicas de diferentes genes para organismos más complejos (plantas, animales, etc.) [8]
- facilitar la expresión genética [9]
Dado que el PAC se derivó de fagos, el PAC y sus variantes también son útiles en la terapia con fagos y estudios de antibióticos basados en PAC. [10]
Ver también
Referencias
- ^ abcd Bajpai, Bhakti (22 de octubre de 2013). "Vectores de alta capacidad". Avances en Biotecnología . págs. 1–10. doi :10.1007/978-81-322-1554-7_1. ISBN 978-81-322-1553-0. PMC 7120981 .
- ^ Bertani, G. (1 de septiembre de 1951). "Estudios sobre lisogénesis i". Revista de Bacteriología . 62 (3): 293–300. doi :10.1128/jb.62.3.293-300.1951. PMC 386127 . PMID 14888646.
- ^ Yarmolinsky, Michael; Hoess, Ronald (noviembre de 2015). "El legado de Nat Sternberg: la génesis de la tecnología Cre-lox". Revista Anual de Virología . 2 (1): 25–40. doi :10.1146/annurev-virology-100114-054930. PMID 26958905.
- ^ abc Sternberg, N (enero de 1990). "Sistema de clonación del bacteriófago P1 para el aislamiento, amplificación y recuperación de fragmentos de ADN de hasta 100 kilopares de bases". Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América . 87 (1): 103–7. Código bibliográfico : 1990PNAS...87..103S. doi : 10.1073/pnas.87.1.103 . JSTOR 2353636. PMC 53208 . PMID 2404272.
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enlaces externos
- Diccionario médico en línea Cromosoma artificial derivado de P1
- Definición del cromosoma artificial (PAC) derivado de P1