La traducción de nick [1] (o traducción de cabeza ), desarrollada en 1977 por Peter Rigby y Paul Berg, es una técnica de marcado en biología molecular en la que se utiliza la ADN polimerasa I para reemplazar algunos de los nucleótidos de una secuencia de ADN con sus análogos marcados, creando una secuencia de ADN marcada que se puede utilizar como sonda en técnicas de hibridación in situ fluorescente (FISH) o de transferencia . También se puede utilizar para radiomarcado . [2]
Este proceso se denomina traducción de mellas porque el ADN que se va a procesar se trata con ADNasa para producir "mellas" monocatenarias. A esto le sigue la sustitución de los sitios mellados por la ADN polimerasa I , que alarga el extremo hidroxilo 3' , eliminando nucleótidos mediante la actividad de la exonucleasa 5'-3' y reemplazándolos por dNTP . Para marcar radiactivamente un fragmento de ADN para su uso como sonda en procedimientos de transferencia, uno de los nucleótidos incorporados proporcionados en la reacción se radiomarca en la posición de fosfato alfa . De manera similar, se puede unir un fluoróforo en su lugar para el marcado fluorescente o un antígeno para la inmunodetección. Cuando la ADN polimerasa I finalmente se separa del ADN, deja otra mella en la cadena principal de fosfato. La mella se ha "traducido" cierta distancia dependiendo de la procesividad de la polimerasa. Esta mella podría ser sellada por la ADN ligasa , o su grupo hidroxilo 3' podría servir como plantilla para una mayor actividad de la ADN polimerasa I. Existen mezclas de enzimas patentadas disponibles comercialmente para realizar todos los pasos del procedimiento en una sola incubación.
La traducción de muescas podría provocar roturas de ADN de doble cadena si la ADN polimerasa I encuentra otra muesca en la cadena opuesta, lo que da lugar a dos fragmentos más cortos. Esto no influye en el rendimiento de la sonda marcada en la hibridación in situ.