En biología celular , el fraccionamiento celular es el proceso que se utiliza para separar los componentes celulares , preservando al mismo tiempo las funciones individuales de cada componente. [1] Este es un método que se utilizó originalmente para demostrar la ubicación celular de varios procesos bioquímicos . Otros usos del fraccionamiento subcelular son proporcionar una fuente enriquecida de una proteína para una mayor purificación y facilitar el diagnóstico de varios estados patológicos. [2]
El tejido se homogeneiza típicamente en una solución tampón que es isotónica para detener el daño osmótico. Los mecanismos para la homogeneización incluyen molienda, picado, troceado, cambios de presión, choque osmótico , congelación-descongelación y ultrasonidos . Luego, las muestras se mantienen frías para evitar daños enzimáticos. Es la formación de una masa homogénea de células (homogeneizado celular o suspensión celular ). Implica la molienda de células en un medio adecuado en presencia de ciertas enzimas con pH, composición iónica y temperatura correctos. Por ejemplo, la pectinasa que digiere la lámina media entre las células vegetales.
Este paso puede no ser necesario dependiendo de la fuente de las células . Sin embargo, es probable que el tejido animal produzca tejido conectivo que se debe eliminar. Por lo general, la filtración se logra vertiendo a través de una gasa o con un filtro de succión y el filtro cerámico de grado correspondiente.
La purificación se logra mediante centrifugación diferencial : el aumento secuencial de la fuerza gravitacional da como resultado la separación secuencial de los orgánulos según su densidad .
Medios para separación celular por densidad: