La inmunoperoxidasa es un tipo de inmunotinción que se utiliza en biología molecular , investigación médica y diagnóstico clínico. En particular, las reacciones de inmunoperoxidasa se refieren a una subclase de procedimientos inmunohistoquímicos o inmunocitoquímicos en los que los anticuerpos se visualizan a través de una reacción catalizada por peroxidasa.
La inmunohistoquímica y la inmunocitoquímica son métodos que se utilizan para determinar en qué células o partes de células se encuentra una proteína u otra macromolécula en particular. Estas tinciones utilizan anticuerpos para unirse a antígenos específicos , generalmente de origen proteico o glicoproteico . Dado que los anticuerpos normalmente son invisibles, se deben emplear estrategias especiales para detectar estos anticuerpos unidos. En un procedimiento de inmunoperoxidasa, se utiliza una enzima conocida como peroxidasa para catalizar una reacción química para producir un producto coloreado.
En pocas palabras, se fija una porción muy fina de tejido sobre un vidrio y se incuba con un anticuerpo o una serie de anticuerpos, el último de los cuales está químicamente ligado a la peroxidasa. Después de revelar la tinción añadiendo el sustrato químico , se puede examinar la distribución de la tinción mediante microscopía .
Originalmente, todos los anticuerpos producidos para inmunotinción eran policlonales , es decir, generados por reacciones normales de anticuerpos en animales como caballos o conejos. Ahora, muchos son monoclonales , es decir, producidos en cultivos de tejidos. Los anticuerpos monoclonales que consisten en un solo tipo de anticuerpo tienden a proporcionar una mayor especificidad antigénica y también tienden a ser más consistentes entre lotes.
El primer paso en la tinción con inmunoperoxidasa es la unión del anticuerpo específico (primario) a la muestra de tejido o célula. La detección del anticuerpo primario puede realizarse directamente (ejemplo 1) o indirectamente (ejemplos 2 y 3).
La tinción óptima depende de una serie de factores, entre ellos la dilución del anticuerpo, los productos químicos de tinción, la preparación o fijación de las células o el tejido y la duración de la incubación con los reactivos de tinción o anticuerpos. Estos factores suelen determinarse mediante ensayo y error, en lugar de aplicar algún tipo de método sistemático.
Se pueden utilizar otras enzimas catalíticas, como la fosfatasa alcalina , en lugar de las peroxidasas, tanto para los métodos de tinción directa como indirecta. Alternativamente, el anticuerpo primario se puede detectar utilizando un marcador fluorescente ( inmunofluorescencia ) o se puede unir a partículas de oro coloidal para su uso en microscopía electrónica .
La tinción de inmunoperoxidasa se utiliza en el diagnóstico clínico y en la investigación de laboratorio .
En el diagnóstico clínico, la inmunotinción se puede utilizar en biopsias de tejido para un estudio histopatológico más detallado . En el caso del cáncer, puede ayudar a subclasificar tumores. La inmunotinción también se puede utilizar para ayudar a diagnosticar enfermedades de la piel, glomerulonefritis y para subclasificar depósitos de amiloide . Las técnicas relacionadas también son útiles para subclasificar linfocitos que tienen un aspecto bastante similar en el microscopio óptico.
En la investigación de laboratorio, se pueden utilizar anticuerpos contra marcadores específicos de diferenciación celular para etiquetar tipos de células individuales. Esto puede permitir una mejor comprensión de los cambios mecanísticos en linajes celulares específicos resultantes de una intervención experimental particular.