La técnica ha sido ampliamente adoptada para su uso en la ingeniería de líneas celulares humanas para generar modelos isogénicos de enfermedades humanas . También se ha utilizado para optimizar líneas celulares bioproductoras para la biofabricación de vacunas proteicas y terapias. Además, debido a la naturaleza no patógena del rAAV, ha surgido como un vector deseable para realizar terapia génica en pacientes vivos.
Vector rAAV
Diagrama de un vector rAAV típico [1]
El genoma del virus de la aberremia viral (rAAV) está formado por ácido desoxirribonucleico monocatenario (ssDNA), de sentido positivo o negativo, que tiene una longitud de aproximadamente 4,7 kilobases. Estos vectores virales de ADN monocatenario tienen altas tasas de transducción y tienen la propiedad única de estimular la HR endógena sin causar roturas de la doble cadena de ADN en el genoma, lo que es típico de otros métodos de edición genómica mediados por endonucleasas homing .
Capacidades
Los usuarios pueden diseñar un vector rAAV para cualquier locus genómico objetivo y realizar alteraciones genéticas endógenas tanto macroscópicas como sutiles en tipos de células somáticas de mamíferos. Estas incluyen la inactivación de genes para la genómica funcional o la "inserción" de etiquetas de proteínas para rastrear eventos de translocación a niveles fisiológicos en células vivas. Lo más importante es que el rAAV se dirige a un solo alelo a la vez y no produce ninguna alteración genómica fuera del objetivo. [2] Debido a esto, es capaz de modelar de manera rutinaria y precisa enfermedades genéticas causadas por SNP sutiles o mutaciones puntuales que son cada vez más el objetivo de los programas de descubrimiento de nuevos fármacos. [2]
Aplicaciones
Hasta la fecha, el uso de la ingeniería genómica mediada por rAAV se ha publicado en más de 2100 revistas científicas revisadas por pares. [3]
Otra aplicación emergente de la edición genómica basada en rAAV es la terapia génica en pacientes, debido a la precisión y la falta de eventos de recombinación fuera del objetivo que ofrece el enfoque.
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