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Actividad estelar

La actividad estrella es la relajación o alteración de la especificidad de la escisión del ADN mediada por enzimas de restricción que puede ocurrir en condiciones de reacción que difieren significativamente de las óptimas para la enzima. El resultado suele ser una escisión en sitios de reconocimiento no canónicos o, en ocasiones, una pérdida total de especificidad.

Las diferencias que pueden conducir a la formación de estrellas incluyen baja fuerza iónica , alto pH y altas concentraciones de glicerol (> 5% v/v ) . [1] La última condición es de particular interés práctico, ya que las enzimas de restricción comerciales generalmente se suministran en un tampón que contiene una cantidad sustancial de glicerol (50% v/v es típico), lo que significa que una dilución insuficiente de la solución enzimática puede causar actividad estrella; Este problema surge con mayor frecuencia durante resúmenes dobles o múltiples. La actividad estelar puede ocurrir debido a la presencia de Mg 2+ , como se ve en HindIII , por ejemplo.

El término actividad estelar fue introducido por Mayer [2] , quien caracterizó la actividad modificada en EcoRI .

Enlaces externos

Referencias

  1. ^ Robinson, CR; Sliger, SG (1993). "Reconocimiento molecular mediado por agua unida: un mecanismo para la actividad estelar de la endonucleasa de restricción EcoRI". Revista de biología molecular . 234 (2): 302–306. doi :10.1006/jmbi.1993.1586. PMID  8230215.
  2. ^ Mayer, Hubert (1978). "Optimización de la actividad EcoRI * de la endonucleasa EcoRI". FEBS Lett . 90 (2): 341–44. doi : 10.1016/0014-5793(78)80400-1 . PMID  352725.