El polimorfismo de longitud de fragmento amplificado ( AFLP-PCR o AFLP ) es una herramienta basada en PCR utilizada en la investigación genética , la toma de huellas dactilares de ADN y en la práctica de la ingeniería genética . Desarrollado a principios de la década de 1990 por KeyGene, [1] AFLP utiliza enzimas de restricción para digerir el ADN genómico , seguido de la ligadura de adaptadores a los extremos pegajosos de los fragmentos de restricción . Luego se selecciona un subconjunto de los fragmentos de restricción para amplificarlos. Esta selección se logra utilizando cebadores complementarios a la secuencia adaptadora, la secuencia del sitio de restricción y algunos nucleótidos dentro de los fragmentos del sitio de restricción (como se describe en detalle a continuación). Los fragmentos amplificados se separan y visualizan al desnaturalizarlos en electroforesis en gel de agarosa , ya sea mediante autorradiografía o metodologías de fluorescencia , o mediante instrumentos automatizados de secuenciación capilar.
Aunque AFLP no debe utilizarse como acrónimo, comúnmente se lo conoce como "polimorfismo de longitud de fragmento amplificado". Sin embargo, los datos resultantes no se califican como polimorfismos de longitud, sino como polimorfismos de presencia-ausencia. [2]
AFLP-PCR es un método altamente sensible para detectar polimorfismos en el ADN . La técnica fue descrita originalmente por Vos y Zabeau en 1993. [3] [2] En detalle, el procedimiento de esta técnica se divide en tres pasos:
La tecnología AFLP tiene la capacidad de detectar varios polimorfismos en diferentes regiones genómicas simultáneamente. También es muy sensible y reproducible. Como resultado, el AFLP se ha utilizado ampliamente para la identificación de variaciones genéticas en cepas o especies estrechamente relacionadas de plantas, hongos, animales y bacterias. La tecnología AFLP se ha utilizado en pruebas criminales y de paternidad, también para determinar ligeras diferencias dentro de las poblaciones, y en estudios de vinculación para generar mapas para análisis de locus de rasgos cuantitativos (QTL).
AFLP tiene muchas ventajas en comparación con otras tecnologías de marcadores, incluido el ADN polimórfico amplificado aleatoriamente ( RAPD ), el polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) y los microsatélites . AFLP no sólo tiene mayor reproducibilidad, resolución y sensibilidad a nivel del genoma completo en comparación con otras técnicas, [4] sino que también tiene la capacidad de amplificar entre 50 y 100 fragmentos a la vez. Además, no se necesita información previa de la secuencia para la amplificación (Meudt y Clarke 2007). [5] Como resultado, AFLP se ha vuelto extremadamente beneficioso en el estudio de taxones que incluyen bacterias, hongos y plantas, donde aún se desconoce mucho sobre la composición genómica de varios organismos.
La tecnología AFLP está cubierta por patentes y solicitudes de patente de Keygene NV AFLP es una marca registrada de Keygene NV
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Programas en línea para simulación de AFLP-PCR