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5-Etinil-2'-desoxiuridina

La 5-etinil-2′-desoxiuridina ( EdU ) es un análogo de la timidina que se incorpora al ADN de las células en división. La EdU se utiliza para analizar la síntesis de ADN en cultivos celulares y detectar células en animales embrionarios, neonatales y adultos que han sido sometidos a síntesis de ADN. [1] Si bien en dosis altas puede ser citotóxica, esta molécula se utiliza ampliamente en la actualidad para rastrear células en proliferación en múltiples sistemas biológicos.

El marcado con EdU permite aislar células sin desnaturalizar el ADN, lo que permite a los investigadores determinar el perfil transcripcional de las células. [2] Este enfoque se ha utilizado para evaluar la transcripción en células neuronales [3] y tejidos [4] que se han dividido recientemente, ya sea in vitro o in vivo .

Detección

El EdU se marca y se detecta con una molécula de azida (más comúnmente azidas fluorescentes ) a través de la química de clic de cicloadición de azida-alquino catalizada por Cu(I) (CuAAC) . [1] [5] A diferencia de la bromodesoxiuridina (BrdU) de uso común , la detección de EdU no requiere tratamiento térmico o ácido.

Toxicidad

La EdU incorporada al ADN induce daño al ADN a través de la formación de enlaces cruzados entre cadenas. [6] Estos son detectados por la célula durante la replicación del ADN , lo que se refleja en la fosforilación de la histona H2AX , el arresto en la progresión del ciclo celular y la apoptosis . [7]

Referencias

  1. ^ ab Chehrehasa F, Meedeniya AC, Dwyer P, Abrahamsen G, Mackay-Sim A (febrero de 2009). "EdU, un nuevo análogo de timidina para etiquetar células proliferantes en el sistema nervioso". Journal of Neuroscience Methods . 177 (1): 122–130. doi :10.1016/j.jneumeth.2008.10.006. hdl : 10072/25744 . PMID  18996411. S2CID  21427874.
  2. ^ Endaya B, Cavanagh B, Alowaidi F, Walker T, de Pennington N, Ng JM, et al. (enero de 2016). "Aislamiento de células tumorales neuronales y cerebrales en división para la elaboración de perfiles de expresión génica". Journal of Neuroscience Methods . 257 : 121–133. doi :10.1016/j.jneumeth.2015.09.020. PMID  26432933. S2CID  44969376.
  3. ^ Endaya BB, Lam PY, Meedeniya AC, Neuzil J (enero de 2016). "El perfil transcripcional de células tumorales en división detecta heterogeneidad intratumoral vinculada a la proliferación celular en un modelo de tumor cerebral". Oncología molecular . 10 (1): 126–137. doi :10.1016/j.molonc.2015.09.001. PMC 5528932 . PMID  26388584. 
  4. ^ Ng HX, Lee EP, Cavanagh BL, Britto JM, Tan SS (septiembre de 2017). "Un método para aislar interneuronas corticales que comparten el mismo cumpleaños para estudios de expresión genética". Neurología experimental . 295 : 36–45. doi :10.1016/j.expneurol.2017.05.006. PMID  28511841. S2CID  3377296.
  5. ^ Cavanagh BL, Walker T, Norazit A, Meedeniya AC (septiembre de 2011). "Análogos de timidina para el seguimiento de la síntesis de ADN". Moléculas . 16 (9): 7980–7993. doi : 10.3390/molecules16097980 . PMC 6264245 . PMID  21921870. 
  6. ^ Ligasová A, Strunin D, Friedecký D, Adam T, Koberna K (11 de febrero de 2015). "Una combinación fatal: un inhibidor de la timidilato sintasa con actividad que daña el ADN". PLOS ONE . ​​10 (2): e0117459. Bibcode :2015PLoSO..1017459L. doi : 10.1371/journal.pone.0117459 . PMC 4324964 . PMID  25671308. 
  7. ^ Zhao H, Halicka HD, Li J, Biela E, Berniak K, Dobrucki J, Darzynkiewicz Z (noviembre de 2013). "Señalización de daño del ADN, deterioro de la progresión del ciclo celular y apoptosis desencadenada por 5-etinil-2'-desoxiuridina incorporada al ADN". Citometría. Parte A. 83 ( 11): 979–988. doi :10.1002/cyto.a.22396. PMC 3846616. PMID  24115313 . 

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