La temporada 2000-01 fue la 86.ª temporada de la Isthmian League , una competición de fútbol inglesa en la que participan clubes semiprofesionales y amateurs de Londres, el este y el sureste de Inglaterra . La liga constaba de cuatro divisiones.
La Premier Division estaba formada por 22 clubes, incluidos 18 clubes de la temporada anterior y cuatro clubes nuevos:
El Farnborough Town ganó la división y regresó a la Football Conference después de dos temporadas en la Isthmian League. El Slough Town, el Carshalton Athletic y el Dulwich Hamlet terminaron últimos de la tabla y descendieron a la División Uno. Tres partidos no se disputaron debido a las malas condiciones meteorológicas.
La Primera División estaba compuesta por 22 clubes, incluidos 17 clubes de la temporada anterior y cinco clubes nuevos: Tres clubes descendieron de la Primera División:
Dos clubes ascendidos desde la Segunda División:
En un principio, el campeón de la División Dos, el Hemel Hempstead Town, iba a ascender a la División Uno, pero más tarde se lo denegaron debido a la nivelación del terreno. El Leatherhead, que terminó en la zona de descenso, fue indultado.
El Boreham Wood ganó la división y volvió a la Premier Division en el primer intento. El Bedford Town y el Braintree Town también consiguieron el ascenso. El Leatherhead terminó en la zona de descenso por segunda vez consecutiva y descendió junto con el Romford y el Barton Rovers.
La Segunda División estaba formada por 22 clubes, incluidos 17 clubes de la temporada anterior y cinco equipos nuevos:
Dos clubes descendieron de la Primera División:
Tres clubes ascendidos desde la Tercera División:
Inicialmente, los campeones de la temporada anterior de la División Dos, el Hemel Hempstead Town, iban a ascender a la División Uno, pero luego se les rechazó debido a la nivelación del terreno y permanecieron en la división.
El Tooting & Mitcham United ganó la división y ascendió a la División Uno junto con el Windsor & Eton y el Barking. Más tarde, el Barking dejó de existir cuando se fusionó con el East Ham United (11° Essex Senior League ) para formar el Barking & East Ham United , que ocupó el lugar del Barking en la División Uno.
La Tercera División estaba formada por 22 clubes, incluidos 17 clubes de la temporada anterior y cinco equipos nuevos:
Arlesey Town y Ashford Town debutaron en la liga y consiguieron el ascenso junto con Lewes. Dos partidos no se disputaron debido a las malas condiciones meteorológicas.