En bioquímica , el ácido 2,2' -azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico) es un compuesto químico que se utiliza para observar la cinética de reacción de enzimas específicas . Un uso común es en el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) para detectar la unión de moléculas entre sí.
Se utiliza habitualmente como sustrato con peróxido de hidrógeno para una enzima peroxidasa (como la peroxidasa de rábano picante ) o solo con enzimas oxidasas multicúpricas azules (como la lacasa o la bilirrubina oxidasa ). Su uso permite seguir la cinética de reacción de las propias peroxidasas . De esta manera, también se puede utilizar para seguir indirectamente la cinética de reacción de cualquier enzima productora de peróxido de hidrógeno , o simplemente para cuantificar la cantidad de peróxido de hidrógeno en una muestra.
Los potenciales de reducción formal del ABTS son lo suficientemente altos como para que actúe como donador de electrones para la reducción de especies oxo, como el oxígeno molecular y el peróxido de hidrógeno, en particular en los valores de pH menos extremos que se encuentran en la catálisis biológica. En estas condiciones, los grupos sulfonato están completamente desprotonados y el mediador existe como dianión.
Se eligió este compuesto porque la enzima facilita la reacción con el peróxido de hidrógeno, convirtiéndolo en un producto final verde y soluble . Su nueva absorbancia máxima de luz de 420 nm (ε = 3,6 × 10 4 M –1 cm –1 ) [2] se puede seguir fácilmente con un espectrofotómetro , un instrumento de laboratorio común. A veces se utiliza como parte de un reactivo de estimación de glucosa al encontrar concentraciones de glucosa en soluciones como el suero sanguíneo .
La industria alimentaria y los investigadores agrícolas también utilizan con frecuencia el ABTS para medir las capacidades antioxidantes de los alimentos. [3] En este ensayo, el ABTS se convierte en su catión radical mediante la adición de persulfato de sodio . Este catión radical es de color azul y absorbe la luz a 415, 645, 734 y 815 nm. [4] El catión radical ABTS es reactivo frente a la mayoría de los antioxidantes, incluidos los fenólicos , los tioles y la vitamina C. [5] Durante esta reacción, el catión radical azul ABTS se convierte de nuevo en su forma neutra incolora. La reacción se puede controlar espectrofotométricamente. Este ensayo se suele denominar ensayo de capacidad antioxidante equivalente de Trolox (TEAC). La reactividad de los diversos antioxidantes probados se compara con la del Trolox , que es un análogo soluble en agua de la vitamina E. [6]
Basándose en las propiedades químicas especiales de los radicales libres formados, el ensayo ABTS se ha utilizado para determinar la capacidad antioxidante de los productos alimenticios. Por ejemplo, los compuestos de polifenol, que se encuentran ampliamente presentes en la fruta, pueden neutralizar los radicales libres dentro del cuerpo humano, previniendo así el daño oxidativo causado por los radicales libres. La potencia antioxidante de un extracto de planta o un producto alimenticio se ha medido mediante el ensayo ABTS. Un ejemplo con un método detallado es el análisis de la actividad antioxidante de los productos de hibisco. [7]