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1-fluoro-2,4-dinitrobenceno

El 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (comúnmente llamado reactivo de Sanger , dinitrofluorobenceno , DNFB o FDNB ) es una sustancia química que reacciona con el aminoácido N-terminal de los polipéptidos . Esto puede resultar útil para secuenciar proteínas .

Preparación

En 1936, Gottlieb presentó una síntesis en la que el 1-cloro-2,4-dinitrobenceno reaccionaba con fluoruro de potasio (KF) en nitrobenceno : [3]

Síntesis de 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno a partir de 1-cloro-2,4-dinitrobenceno en nitrobenceno con fluoruro de potasio

Usos

Federico Sanger

En 1945, Frederick Sanger describió su uso para determinar el aminoácido N-terminal en cadenas polipeptídicas, en particular la insulina . [4] Los resultados iniciales de Sanger sugirieron que la insulina era una molécula más pequeña de lo estimado previamente (peso molecular 12.000), y que constaba de cuatro cadenas (dos terminadas en glicina y dos terminadas en fenilalanina ), con las cadenas entrecruzadas por enlaces disulfuro. . Sanger continuó trabajando sobre la insulina, utilizando dinitrofluorobenceno en combinación con otras técnicas, y finalmente dio como resultado la secuencia completa de la insulina (que consta de sólo dos cadenas, con un peso molecular de 6.000). [5]

Tras el informe inicial de Sanger sobre el reactivo, el método del dinitrofluorobenceno fue ampliamente adoptado para estudiar proteínas, hasta que fue reemplazado por otros reactivos para análisis terminales (p. ej., cloruro de dansilo y más tarde aminopeptidasas y carboxipeptidasas ) y otros métodos generales para la determinación de secuencias (p. ej., Edman degradación ). [5]

El dinitrofluorobenceno reacciona con el grupo amino de los aminoácidos para producir dinitrofenilaminoácidos . Estos DNP-aminoácidos son moderadamente estables en condiciones de hidrólisis ácida que rompen los enlaces peptídicos . Luego se pueden recuperar los aminoácidos DNP y descubrir la identidad de esos aminoácidos mediante cromatografía . Más recientemente, el reactivo de Sanger también se ha utilizado para el análisis bastante difícil de distinguir entre las formas reducidas y oxidadas de glutatión y cisteína en sistemas biológicos junto con HPLC. Este método es lo suficientemente robusto como para poder realizarse en matrices tan complejas como sangre o lisado celular. [6] [7]

Método de Sanger de análisis de grupos terminales de péptidos: A derivatización del extremo N -terminal con reactivo de Sanger (DNFB), B hidrólisis ácida total del péptido dinitrofenilo

Ver también

Referencias

  1. ^ ab Oxford MSDS
  2. ^ abc CRC Handbook of Chemistry and Physics , 90. edición, CRC Press, Boca Raton, Florida, 2009, ISBN  978-1-4200-9084-0 , Sección 3, Constantes físicas de compuestos orgánicos , p. 3-260.
  3. ^ Billroth Gottlieb, Hans (1936). "La sustitución del cloro por flúor en compuestos orgánicos". Mermelada. Química. Soc. 58 (3): 532–533. doi :10.1021/ja01294a502.
  4. ^ Sanger, F (1945). "Los grupos amino libres de la insulina". La revista bioquímica . 39 (5): 507–15. doi :10.1042/bj0390507. PMC 1258275 . PMID  16747948. 
  5. ^ ab Joseph Fruton , Proteínas, enzimas, genes: la interacción de la química y la biología . New Haven: Yale University Press, 1999. p. 216.
  6. ^ Dominick, Pamela K.; Cassidy, Pamela B.; Roberts, Jeanette C. (2001). "Un método nuevo y versátil para la determinación de tiolaminas de importancia biológica". Revista de Cromatografía B: Ciencias y Aplicaciones Biomédicas . 761 (1): 1–12. doi :10.1016/S0378-4347(01)00298-5. PMID  11585123.
  7. ^ Bronowicka-Adamska, Patrycja; Zagajewski, Jacek; Czubak, Jerzy; Wróbel, María (2011). "Método RP-HPLC para la determinación cuantitativa de cistationina, cisteína y glutatión: una aplicación para el estudio del metabolismo de la cisteína en el cerebro humano". Revista de cromatografía B. 879 (21): 2005-2009. doi :10.1016/j.jchromb.2011.05.026. PMID  21665555.

Literatura

enlaces externos