El 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (comúnmente llamado reactivo de Sanger , dinitrofluorobenceno , DNFB o FDNB ) es una sustancia química que reacciona con el aminoácido N-terminal de los polipéptidos . Esto puede resultar útil para secuenciar proteínas .
En 1945, Frederick Sanger describió su uso para determinar el aminoácido N-terminal en cadenas polipeptídicas, en particular la insulina . [4] Los resultados iniciales de Sanger sugirieron que la insulina era una molécula más pequeña de lo estimado previamente (peso molecular 12.000), y que constaba de cuatro cadenas (dos terminadas en glicina y dos terminadas en fenilalanina ), con las cadenas entrecruzadas por enlaces disulfuro. . Sanger continuó trabajando sobre la insulina, utilizando dinitrofluorobenceno en combinación con otras técnicas, y finalmente dio como resultado la secuencia completa de la insulina (que consta de sólo dos cadenas, con un peso molecular de 6.000). [5]
Tras el informe inicial de Sanger sobre el reactivo, el método del dinitrofluorobenceno fue ampliamente adoptado para estudiar proteínas, hasta que fue reemplazado por otros reactivos para análisis terminales (p. ej., cloruro de dansilo y más tarde aminopeptidasas y carboxipeptidasas ) y otros métodos generales para la determinación de secuencias (p. ej., Edman degradación ). [5]
El dinitrofluorobenceno reacciona con el grupo amino de los aminoácidos para producir dinitrofenilaminoácidos . Estos DNP-aminoácidos son moderadamente estables en condiciones de hidrólisis ácida que rompen los enlaces peptídicos . Luego se pueden recuperar los aminoácidos DNP y descubrir la identidad de esos aminoácidos mediante cromatografía . Más recientemente, el reactivo de Sanger también se ha utilizado para el análisis bastante difícil de distinguir entre las formas reducidas y oxidadas de glutatión y cisteína en sistemas biológicos junto con HPLC. Este método es lo suficientemente robusto como para poder realizarse en matrices tan complejas como sangre o lisado celular. [6] [7]
Método de Sanger de análisis de grupos terminales de péptidos: A derivatización del extremo N -terminal con reactivo de Sanger (DNFB), B hidrólisis ácida total del péptido dinitrofenilo
^ Billroth Gottlieb, Hans (1936). "La sustitución del cloro por flúor en compuestos orgánicos". Mermelada. Química. Soc. 58 (3): 532–533. doi :10.1021/ja01294a502.
^ Sanger, F (1945). "Los grupos amino libres de la insulina". La revista bioquímica . 39 (5): 507–15. doi :10.1042/bj0390507. PMC 1258275 . PMID 16747948.
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^ Bronowicka-Adamska, Patrycja; Zagajewski, Jacek; Czubak, Jerzy; Wróbel, María (2011). "Método RP-HPLC para la determinación cuantitativa de cistationina, cisteína y glutatión: una aplicación para el estudio del metabolismo de la cisteína en el cerebro humano". Revista de cromatografía B. 879 (21): 2005-2009. doi :10.1016/j.jchromb.2011.05.026. PMID 21665555.
Literatura
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Wilkins, A.; Pequeño, RWH (1991). "Estructura del 1-fluoro-2,4-dinitrobenceno". Acta Crystallographica Sección C. 47 (1): 220–221. Código Bib : 1991AcCrC..47..220W. doi :10.1107/S0108270190007326.